Federación Mexicana de Patología Clínica, A.C.

I N T R O D U C C I Ó N

Isavuconazol es el fármaco antifúngico triazólico más nuevo disponible para uso a nivel clínico. Posee importantes ventajas sobre voriconazol y en algunos casos sobre posaconazol, por lo que es una alternativa para el manejo de pacientes complejos con infección fúngica invasora (IFI). Inicialmente su dosificación endovenosa y oral está estandarizada por peso del paciente y no requeriría ajustes de dosificación. Sin embargo, pequeños estudios han demostrado que no todos los pacientes logran niveles plasmáticos terapéuticos de isavuconazol y que por consiguiente surge la interrogante de poder optimizar el tratamiento antifúngico por medio de la monitorización de niveles plasmáticos. En nuestro hospital, se está introduciendo el uso de isavuconazol en pacientes oncológicos con IFI, que han presentado inconvenientes al usar antifúngicos de primera línea. Rutinariamente, en nuestro laboratorio clínico, se monitorizan niveles plasmáticos de voriconazol y posaconazol, y en una prueba in-vitro se pudo extraer, separar e identificar isavuconazol desde plasma humano. El poder contar con una metodología validada para medir niveles de isavuconazol en plasma ayudaría a optimizar el uso de este medicamento en un tratamiento desafiante para el equipo clínico.

O B J E T I V O

Validar la cuantificación de niveles plasmáticos de isavuconazol por cromatografía líquida.

M A T E R I A L E S  Y  M É T O D O

Para la validación se usará la Guía M10 de la ICH-EMA sobre validación de métodos bioanalíticos y análisis de muestras de estudio. Los parámetros analíticos estudiados corresponderán a: selectividad, especificidad, efecto matriz, curva de calibración y rango, precisión y exactitud, carry-over, integridad de dilución, estabilidad y reproducibilidad de inyección. Los parámetros deberán cumplir los valores recomendados por la guía para ser aceptados. Las condiciones analíticas serán optimizadas para poder cuantificar los tres antifúngicos triazólicos: voriconazol, posaconazol e isavuconazol, usando como estándar interno ketoconazol, en una sola extracción y corrida cromatográfica. La extracción será líquidolíquido usando tert-butilmetileter, seguido de una corrida cromatográfica isocrática en HPLC usando una columna C8 15cm x 4.6mm, 5um.

R E S U L T A D O S

En las pruebas de selectividad y especificidad no se detectaron señales interferentes a los tiempos correspondientes a voriconazol (tiempo de retención: 3.18 min), posaconazol (tiempo de retención: 5.21 min) e isavuconazol (tiempo de retención: 6.77 min), ni tampoco en el estándar interno ketoconazol (tiempo de retención: 4.29 min). Con respecto al efecto matriz, se obtuvo que la exactitud y precisión fueron menores al 15%. La curva de calibración resultó lineal (r20,99) entre las concentraciones de 0,1 a 15 ug/ml para los tres analitos. La exactitud y precisión intra e inter-corrida fueron en promedio menores al 15% con respecto a la concentración nominal y al CV para los controles bajo, medio y alto. En la metodología no se observó carry-over al inyectar una muestra blanco-seguida de una concentración alta para ninguno de los analitos y en la prueba de integridad de dilución, las diluciones 1:2 mostraron ser aptas. La estabilidad de las muestras de plasma resultó ser de 7 días a temperatura de -20°C. Finalmente, en reproducibilidad de la inyección, se pudo demostrar que es necesario que las muestras sean tapadas y refrigeradas para evitar la pérdida de volumen desde los insertos si es que se requiere volver a inyectar las muestras extraídas.

C O N C L U S I O N E S

La técnica implementada para cuantificar isavuconazol en plasma humano cumple con los requisitos dispuestos en la Guía M-10 para medir fármacos en matrices biológicas y es apta para realizar monitorización de niveles plasmáticos a nivel clínico.