Federación Mexicana de Patología Clínica, A.C.

I N T R O D U C C I Ó N

El virus HIV afecta a millones de varones a nivel mundial (aproximadamente 740,000) los cuales desean tener descendencia. El uso de retrovirales ha permitido controlar la enfermedad y el uso de preservativos ha permitido disminuir la infección. En algunos centros de reproducción asistida, el uso de lavado de semen para muestras infectocontagiosas ha resultado una técnica exitosa para obtener espermatozoides libres de agentes infecciosos y útiles para fertilización in vitro. En el caso de HIV, es importante contar con un método altamente sensible que permita determinar el lavado exitoso de la muestra. La PCR digital ha surgido como una alternativa muy sensible para la cuantificación absoluta de dianas moleculares y es un candidato ideal para analizar bajas concentraciones de virus en muestras biológicas.

O B J E T I V O

Determinar la factibilidad técnica de cuantificar carga viral de HIV mediante PCR digital en muestras de líquido seminal, espermatozoides y espermatozoides lavados de pacientes seropositivos a VIH.

M A T E R I A L E S  Y  M É T O D O

Se obtuvieron 25 muestras de seminales de pacientes seropositivos a HIV que acudieron a una clínica de fertilidad para procedimiento de lavado de semen de HIV. Se realizo el lavado para posteriormente tomar una muestra y congelarla. La muestra congelada. Las muestras se extraen mediante método de perlas magnéticas para la extracción de RNA a partir de muestras biológicas. La muestra se cuantifica usando un nanophotometer para posteriormente realizar una PCR digital con un primer para detectar VIH-1. Estas muestras se procesaron en el equipo Qiacuity (Qiagen).

R E S U L T A D O S

Los resultados muestran que la dPCR es capaz de detectar el control interno (CI) en todas las muestras de semen analizadas, lo que indica que no hubo interferencias significativas ó inhibidores que afectaran el rendimiento de la reacción. La presencia del CI en todas las muestras indica que el sistema de dPCR funcionó correctamente, validando la calidad y fidelidad de resultados. En la detección del VIH, los resultados indican que el virus fue detectado en 2 muestras sin lavar, sin embargo, la concentración obtenida de copias/mL se considera no detectado.

C O N C L U S I O N E S

La técnica de PCR digital es una técnica sensible y específica para la determinación de HIV en muestras de semen. Esta técnica puede utilizarse como una metodología para realizar el control de calidad en el lavado de esperma de pacientes HIV positivos que desean concebir mediante técnicas de fertilidad asistida.